【應用專輯】以TNF-alpha快速篩選抗發炎藥物

【摘要】

發炎反應(Inflammation)是具有血管系統的活體組織對致炎因子及局部損傷所發生的防禦性為主的反應，發炎時伴隨著內皮細胞趨化因子及黏著分子的大量表達，會導致嗜中性球(Neutrophil)浸潤及組織破壞，長期發炎可引起一系列疾病，如花粉症、牙周炎、動脈粥樣硬化、類風濕性關節炎，甚至癌症。抗發炎藥物能調節發炎反應、降低組織損傷，治療並緩解疼痛。本文將介紹如何在高通量平台Paradigm中，以TNF-alpha加速篩選藥物開發的流程。

【TNF-alpha的篩選平台】

Alpha LISA®

是一種研究分子-分子間交互作用的檢測方法，可用於細胞因子定量和抗發炎藍細菌的篩選，與傳統的ELISA方法相比，AlphaLISA可減少由於洗滌過程造成的細胞層損傷，得到更小的標準差和更準確的結果。

SpectraMax® Paradigm

為高速多功能微孔盤分析平臺，搭載卡匣式昇級系統，其強悍的光學核心可以高速定量細胞因子TNF-alpha或偵測人類內皮細胞中的抗發炎代謝物。

【發炎促進因子檢測】

人類肺微管內皮細胞 (HLMVEC)以純化的人源TNF-alpha刺激後，誘導出細胞間黏著分子ICAM-1的表達。共培養18小時後，以AlphaLISA進行發炎促進因子定量 (圖2A) 。

內皮細胞被TNF-alpha或LPS刺激後，會分泌潛在的中性白細胞化學誘導劑IL-8，並滲入發炎組織。因此透過IL-8分泌量可以分析血管內皮細胞的發炎狀態。一樣使用 AlphaLISA，分析受刺激的HL-MVEC細胞培養上清液，評估 IL-8分泌水準 (圖2B) 。

【藻藍素抗發炎化合物篩選】

由藍藻(或稱藍細菌，是螺旋藻的一種)，其富含大量的藻藍素(藻膽蛋白)，擁有多種藥理性質，包括抗菌、抗氧化、抗發炎、免疫增強等，在診斷、食品、化粧及制藥工業上有廣泛的應用，是極具潛力的化合物。

以來源不同的藻藍素預處理HL-MVEC，然後再用0.4ng人類TNF-alpha 進行刺激。18小時後，用以述篩選平台檢ICAM-1及IL-8。

圖3結果顯示編號8721,6化合物展示出 ICAM-1的顯著減少，表明了它的抗發炎活性。這一成分同樣展示出IL-8分泌明顯降低( 數據未展示)。此成分在進行AlphaLISA前已測試過細胞毒性，結果表明對健康細胞無害。

【好評推薦】

 

SpectraMax Paradigm平臺結合AlphaLISA提供了一個強有力的篩選工具，可在基於病理學相關的內皮細胞模型中發現新的治療方案。

優勢

• 卡匣式昇級系統
• 高達1536孔的超高通量
• 優異的速度和靈敏度
• 內建實驗範本讓您更快獲得結果

Molecular Devices SpectraMax Paradigm^®多功能微孔板檢測平臺是一個用戶可升級的微孔板讀板機，用戶可在 2 分鐘內完成功能升級。只要用戶想要升級其檢測功能，Alpha技術可以在任何時候加入系統中。

我們誠摯的感謝 IMC 應用科學學院的 Maren Plüger, AnitaEigner, Maria Hirschler, Linda Kotnik, Katrin Fuchslueger, Julia Schweiger, Christoph Wiesner,Andreas Eger, Wolfgang Schütt, 和Harald Hundsberger, Krems, Austria,以及捷克科學院的 Jiri Kopecky，為我們慷慨提供這裡的實驗資料。

參考文獻

1. Rasool, M.; Sabina, E. P.; Lavanya, B. Biol Pharm Bull 2006,29(12), 2483.
2. Romay, C.; Armesto, J.; Remirez, D.; Gonzalez, R.; Ledon, N.; Garcia, I. Inflamm Res 1998, 47(1), 36.[31]
3. Prinsep, M. R.; Thomson, R. A.; West, M. L.; Wylie, B. L. J Nat Prod 1996, 59(8), 786

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