【應用專輯】自動化縮時成像完成血管新生評估
導言 血管新生，即由現有血管形成的新血管的過程，是與脊椎動物發育和傷口癒合有關的重要生理現象。在嚴格的自我恆定調節下，血管新生的過程受到促進血管新生和抗血管新生分子的作用控制。而破壞此恆定調節已被證明在多種疾病中扮演重要腳色。 1 血管保護或血管新生過程不足涉及多種退行性疾病，如 心肌梗塞 、 神經退行性疾病 等。 4 血管增生或形態的異常亦與許多疾病有關，如 癌症 、 慢性發炎 和 黃斑部病變 。 1,3-5 開發各種以細胞為基礎來研究血管新生的方法，如促進和抑制血管新生化合物的作用，對於開發治療癌症、缺血性心臟病和其他疾病的藥物至關重要。成像方法對於評估血管新生很重要，因此使用穩定且精確的成像系統和軟體來適當地擷取、分析和量化這種複雜的生物學過程是非常關鍵的 。 我們使用 共培養血管新生模型 ，包含正常人真皮纖維母細胞 (human dermal fibroblasts) 和表現 GFP(Sartorius IncuCyte® 血管新生 96 孔試劑組 ) 的慢病毒感染人類臍帶靜脈內皮細胞 (HUVEC) ，示範以 ImageXpress® Pico 自動細胞成像系統來定量評估血管新生。以 非連續活細胞縮時攝影 方式，來評估促進 / 抑制血管新生化合物隨時間對 HUVEC 血管新生管形成的劑量依賴性 (dose-dependent effect) 。亦使用自動影像定量的多種參數，進行錯綜複雜的 血管網絡分析 。 【關鍵技術】 ➤ 利用活細胞縮時攝影觀察血管網絡成型。 ➤ 使用內建血管新生分析模組進行 HUVEC 細胞定量。 ➤ 產生多參數評估血管新生網絡，包括長度、面積以及數量分支、區段 (segment) 和連接集 (connect set) 。 【實驗材料】 IncuCyte 血管新生 96 孔試劑組 (Sartorius ， Cat. # 4452) ，包含： 正常人真皮纖維母細胞 (NHDF) 人類臍帶靜脈內皮細胞，表現 CytoLight Green (HUVEC CytoLight Green) 培養液 IncuCyte 血管新生試劑組 VEGF / Suramin 試劑組 (Sartorius ， Cat. # 4437) 96 孔透明底黑盤 (Greiner ， Cat. # 655090) Rapamycin ...