Molecular Devices

【簡介】 報告基因( reporter gene) 是研究真核基因表達的常見工具，市面上常見的雙冷光素酶報導基因檢測系統(Dual-Luciferase ® Reporter Assay)為常用的基因活性檢測工具。此類雙冷光素酶系統會同時檢測螢火蟲(Firefly)和海腎(Renilla)冷光素酶發光值，消除常見的轉染細胞效率以及細胞數等變異。FlexStation 3為具有移液功能的新一代多功能微量盤式分析儀，同時進行移液加液和讀取數值的方 式可為此種高通量雙冷光素酶系統提供一個強而有力的測量平臺。 【雙冷光素酶系統檢測原理】 兩種冷光素酶的反應如下所示。螢火蟲冷光素酶氧化 冷光素(luciferin)時， 依賴ATP和Mg 2+ 輔助催化。海腎冷光素酶氧化 腔腸素(coelenterazine)的氧化，則不需要ATP和 Mg 2+ 。 利用這種特性，測量完螢火蟲冷光素酶表達量後，加入Stop&Glo ® 試劑會同時中止螢火蟲冷光素酶反應， 並誘發海腎冷光素酶作用發光。 SoftMax ®  Pro軟體可設定自動擷取兩組冷光訊號，並自動分析生成反應曲線，計算兩組冷光酶的表達量 。 【FlexStation整合移液系統的優勢】 可簡易更換 8 或 16 通道移液頭，適用 96 和 384 孔盤的檢測。 使用小型注射器可降低dead volume，節省試劑。 一次性吸頭減少了每次加液和每次實驗之間的交叉污染風險。 加液後的震盪功能有利於低體積檢測的樣品混勻。 系統也提供如自訂加液高度、加液速度等參數，輕鬆優化檢測流程。 軟體中可跟據實際需求，對同一個孔格設定多次加液，方便迅速測量加入激動劑和拮抗劑後的訊號。 【材料與方法】 以Firefly 和Renilla luciferase標準品檢測為例 【材料】 Dual-Luciferase ® Reporter Assay系統試劑盒(Cat# E1960,Promega公司) Passive lysis Buffer, PLB 5X, Luciferase assay buffer, LAR II, Luciferase Substrate, Stop & Glo ® substrate 50X 和Stop&Glo ® buffer。 1 mg/m

【介紹】 全球數以百萬計的人受到神經失調的影響，且此數據正在逐步攀升。雖然確切原因還有待釐清，但環境因子是可能的因素之一。為了加速開發更有效、更安全的藥物，越來越需要複雜性更高、具生物相關性、具預測性且以細胞為基礎的平台，藉此從更大範圍的樣品中找出潛在神經毒性因子。為了達到此目的，在此我們介紹由已分化的皮質神經和星形膠質細胞共同組成的人源神經 iPSC 3D共培養平台（iPSC-Derived microBrain ® 3D platform）。 3D神經球可產生自發性同步鈣離子震盪（calcium oscillation），且易於偵測，而此進階的神經學平台已經對高通量篩選應用優化過，適用384孔盤格式，並具備高度穩定性。3D神經球的鈣離子振盪複分析的新方法允許對振盪峰進行檢測和多參數表徵，這些振盪峰包括振盪速率、峰寬和幅值、次級峰的表徵、波形不規則性和其他幾個重要讀數。此外細胞和粒腺體毒性評估的高內涵成像，神經球內鈣離子振盪的過程可用包含震盪頻率、波峰間距、震幅和波型的不規則性等來做多參數分析，而細胞和粒線體毒性亦可用高內涵影像進行評估。我們檢測了包括藥物、殺蟲劑、阻燃劑與其他化學物質在內共 87 種化合物的神經毒性，結果顯示57%對神經有影響，顯示iPSC 3D神經球檢測平臺是一種大有可為的工具，可用於評估藥物和環境毒物的潛在神經毒性。 iPSC-Derived microBrain ®  3D StemoniX ®  microBrain ®  3D 實驗平台是一種高通量的三維培養平台，更接近於人腦組織的發育和構成。在這個平台上，人源iPSC神經細胞球直徑約 600 μm，是由生理功能活躍的皮質麩胺酸神經元（glutamatergic）、氨基丁酸（GABAergic）神經元（MAP2 標記，綠色）和星形膠質細胞（GFAP 標記，紅色）共同培養而成。這種平衡的細胞混合促使豐富的突觸的神經網路得以發展，創造一個高度功能性的神經回路。microBrain 3D 球體中的神經元細胞具有生理活性，並帶有易偵測之同步自發鈣離子振盪現象。 ●  StemoniX microBrain 3D spheroids   ● 【 儀 器 】 ● FLIPR Penta 系統，配有新型高速相機和新 ScreenWorks ®  Peak Pro™ 2 軟體模組 ●   系統支援