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【微學堂】Z因子解體真書:一次搞懂原理與應用!!

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Z 因子(Z-factor)的由來 『HTS技術』(High Throughput Screening, 高通量篩選)是80年代後期發展起來的一種藥物篩選新技術,能夠準確、快速地從大型化學物庫中鑒定活性化合物(“Hits”),逐漸成為 新藥開發 中重要工具。 檢測中的所有數值都有一定程度的變化範圍,這是由於每種檢測方法的性質、儀器和人為的隨機誤差引起的擾動所造成。客觀上 測量變化越小,所選出的 Hits的“真實”可信度就越高 。 有兩種指標能用來約略表示檢測的品質: 1:訊號與雜訊的比值(S/N ratio) 2:訊號與背景的比值(S/B ratio)。 S/B的運算式定義為: S/B= mean signal mean background S/B值提供訊號與背景的比值,但無法顯示訊號和背景的變動差異 S/N 的運算式定義為: S/N= mean signal-mean background SD of background 相較於S/B,S/N值有針對背景值的變化作考量,因此在相同平均訊號與背景差異下,背景變動越小則S/N值越高。但S/N值並無考量到訊號的變動。 可是,這兩個指標都無法充分考量 樣品和背景測量的變異性 以及 訊號的動態範圍 ,因此都不能很好的反映檢測品質。 直到 1999 年,Zhang 等人定義了一個 “Z因子” (Z-factor) 作為評量標準,此係數可有效克服上述弱點,更適用於評估 試驗品質 。 Z因子它還有以下特點: 1:是 無因次量 (Dimensionless Quantity)的參數,因此適用於不同檢測分析的比較。 2:不僅為比較和評估分析的品質提供了有用的工具,還可 用於分析的優化和驗證 。 【 Z 因子的方程式 】 通常在驗證HTS 分析時,會將未知樣品與對照組一起進行分析。驗證測試中包含 陽性對照組 與 陰性對照組 的多個樣品測試,評估在活性範圍的兩個極端情況下,實驗再現性和訊號變化。其中陽性對照組平均值與陰性對照組平均值之間的差異就是檢測的 動態範圍 。 Z因子的方程式定義為: Z=1- 3(SD of sample+SD of control) |mean of sample-mean of control| Z 因子對資料可變性以及訊號動態範圍都可感應。例如當分子接近零(代表樣品與背景值的標準差極小),或者當分...

【SMP小教室】有關平行性分析(PLA),你應該知道的三件事

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【摘要】 平行性分析(PLA, Parallel line Assay)   PLA方法常用於研究者無法直接檢測一個生物製品的活性,而只能透過檢測其在細胞/生物體內不同劑量效果(dose response)來間接評估時,例如分析藥效藥劑動力學時的生體相等性(BE, Bioequivalence) 或生體可用率(BA, Bioavailability)等。   另外在如 藥物活性比較、分析物鑒定、交叉反應、干擾物質、基質補償、濃度估算和抑制效應等研究中也有廣泛的應用 。 目前 主流的 PLA 比較方法 為兩類: 1. 效應比較法 2. 參數比較法 不論您所採用的是那一種分析,有幾個前提需要特別注意! 1. 「參考曲線」(Reference curve)的來源 ?   跟據來源的不同,有可能需要再評估是否需要調整權重(adjust weighting)再進行分析。 2. 「曲線擬合度是否最佳化」?   一般而言可以利用殘差分析(residual analysis)、SSE法或AIC法來評估,避免在後續分析中錯誤評估相對活性(Relative potency)。 3. 「採取何種統計方法」?   跟據不同的樣品及試驗目的,可選擇F-Test, Chi-Test或T-Test幾種不同的方式來評估試驗組的平行性。與您的統計顧問進一步討論,能更淮確選擇正確的統計模型。   本篇圖文附上了三篇有關於 PLA的應用資料 ,有興趣的人可以下載來研讀,希望能讓大家更好地掌握 平行性測試的相關方法和資訊哦!   以下是幾個使用SoftMax Pro的PLA範本進行的分析畫面,SoftMax Pro軟體可以提供23+以上的線性擬合(Curve fitting)選項,並提供Independent fit/Global fit的每個參數單獨的權重或數值設定。PLA範本更是貼心地將三大分析方法(F-Test, Chi-Test, T-Test)都完整羅列,使用者只需要在讀取後將layout及濃度資訊填入,系統就可以一次性把所有的統計資訊展示在您面前。使用者也可以跟據自身或公司需求調整範本的公式或參數,並在內部審核後,鎖定成為符合GXP標準的Protocol。 點下方連結下載三篇應用特輯: 1. 《使用SoftMax Pro 7軟體進行平行線分析和相對活性評價》 2. 《使...