【應用專輯】如何快速攻克DLR(Dual luciferase reporter)檢測?
報告基因系統已是非常成熟的真核生物細胞表達，及細胞生理的研究工具。一般常用的單一Luciferase系統容易受到操作流程中的pipetting操作差異、細胞裂解效率、細胞活性等影響實驗的有效性。採用了Firefly及Renilla兩種luciferase的雙報告基因系統，則能克服上述干擾，提供研究者更簡單可靠的結果。
近期的文獻中有多篇採用Molecular Devices microplate reader設備進行基於Luciferase報告基因的檢測案例，包括
Molecular Cell (Mol Cell. 2017 Jun 7. pii: S1097-2765(17)30362-3. 使用SpectraMax i3X)Nature(Nature. 2017 Jun 21. 使用SpectraMax系列)Nature medicine(Nat Med. 2017 Jun;23(6):742-752. 使用SpectraMax L)。
以Chen et al.發表在Molecular Cell的文獻為例，本文會帶領您從原理出發，如何設定SpectraMax i3x+自動注射器來快速完成DLR檢測。
螢火蟲Luciferase的公式非常重要，因為多數LUC檢測方法都是基於這個公式。例如通過改變基質的結構，引入特定的蛋白酶靶向序列就可以利用該公式進行酶的活性檢測，如以Caspase-3活性衡量細胞凋亡。
注意!! 要保證實驗環境無微生物污染，以避免其內生ATP干擾實驗結果。
圖2下為海腎Luciferase反應式，海腎Luciferase反應不依賴於ATP和鎂離子，故作為對照組，兩者結合就完成了是雙報告基因系統(DLR，案例見圖3右)。其原理可以通過海腎Luciferase的反應式闡釋(圖2下)。
在這裡也需要強調不同的酶反應之間的在這裡也需要強調不同的酶反應之間的引入的試劑也絕對不能交叉污染的，因為海腎Luciferase檢測時引入的抑制劑能非常強烈的抑制螢火蟲Luciferase反應。
注意!! 使用自動注射器進行檢測時，最好用“雙通道”機型避免交叉污染。
市面上主要有市面上主要有快反應和和慢反應兩種，選擇時需注意儀器配置，靈敏度和通量的需求。快反應型靈敏度高但是需要配備自動注射器，慢反應半衰期長，實驗操作更為靈活。以MD產品為例，
- 快反應試驗可選擇SpectraMax i3X、SpectraMax iD3或SpectraMax L
- 慢反應試驗則可選SpectraMax M3/M4/M5。
SoftMax Pro最新版本中，有提供內建DLR 模板，可於Acquisition view模式下，從template中選取DLR/DLR SmartInject直接套用。
SpectraMax i3x及iD3/iD5搭載新一代自動注射器，可以為您帶來：
A. SmartInject技術：在加樣的同時進行震盪混合，確保試劑均勻度及冷光訊號快速產生，可減少孔間差異並提高檢測靈敏度。
B. 獨家專利Bubble detection技術：自動即時監測注射管路內產生的氣泡，保證實驗的檢測準確性。
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