【應用專輯】最新! Ⅰ型干擾素生物活性檢測
干擾素(Interferon,IFN)為動物細胞感染病毒後,所分泌具抗病毒功能的“宿主特異性醣蛋白”,能與周圍未感染的細胞中的受體作用,促使這些細胞合成抗病毒蛋白防止進一步的感染,另外也應用於腫瘤治療中。
由於干擾素治療有效果高、副作用低、容易生產的優勢,已經成為治療各種疾病不可或缺的藥物之一。未來應用更將擴展到人類醫療、畜牧養殖等多個方面。隨著生物技術藥物表達系統的發展,干擾素類藥物的生產規模將而不斷擴大,產品的分泌水準、產品離分純度提高;全球藥物市場中干擾素在2014的市場規模已達為80.49億美元,後續成長亦不容小覷。
干擾素具有多種不同的分析方面,其中包括了
1. 干擾素鑒別試驗
2. 干擾素雜質檢查
3. 干擾素生物活性的測定
其中干擾素藥物的生物活性測定,已發展有多種方法,其中包括細胞裂變法、時間分辨螢光法、ELISA法、LDH釋放法等,2010年藥典收錄的唯一標準檢測方法為等,2010年藥典收錄的唯一標準檢測方法為細胞裂變法。
【細胞裂變法】
本法檢測原理依據干擾素可以保護人羊膜細胞(WISH)免受水泡性口炎病毒(VSV)破壞的作用,用結晶紫對存活的WISH細胞染色,於波長570nm處測定其吸光度,可得到干擾素對WISH細胞的保護效應曲線。
但此測定干擾素生物學活性存在很多弊端,首先其檢測受限於光吸收的方法,重複性差、靈敏度低,此外還會受到諸如所用WISH細胞株的生長狀態、鋪板細胞數目、VSV滴度已經病變終止時間的確定等因素都會影響實驗結果,所以急需尋找更為靈敏、穩定、有效的測定手段。
【新一代 報導基因檢測法】
為了適應未來大批量、高靈敏度、高穩定性檢測需求,最新開發出的為了適應未來大批量、高靈敏度、高穩定性檢測需求,最新開發出的螢光素酶報告基因-Ⅰ型干擾素檢測方法,亦列入2015年中國藥典中。
相對於細胞裂變法,此方法將含有干擾素刺激反應元件和螢光素酶基因的質粒轉染到HEK293細胞中,構建相對於細胞裂變法,此方法將含有干擾素刺激反應元件和螢光素酶基因的質粒轉染到HEK293細胞中,構建細胞系HEK293puroISRE-Luc,作為生物學活性測定細胞。當Ⅰ型干擾素與細胞膜上的受體結合後,通過信號轉導,啟動干擾素刺激反應元件,啟動螢光素酶的表達,表達量與干擾素的生物學活性成正相關。
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