Molecular Devices

  【摘要】 　 細胞是生物體基本的結構和功能單位，也是生命活動的基本單位。細胞模型已經成為藥物篩選和疾病研究最常用、也最基礎的生物平台。以細胞健康測定為例，以螢光標定後，可結合如微孔盤測讀，顯微影像或流氏系統進行定量分析。 【螢光法】 　 螢光法 是一種染色標定的策略，利用分子團可吸收特定波長的激發光 (Excitation) ，短暫維持後逸散出發射光 (Emission) 的特性 ( 圖 1& 圖 2) 。配合光學儀器的濾片篩選 ( 圖 3) ，將受標定的目標顯示出來。因為未被標定的背景及物體無法發光，可以大幅提昇觀測的靈敏度及動態範圍，特別適合用來觀測細胞，甚至次細胞層級的細微構造及變化。 細胞活力 　 從不同的切入點量測細胞健康/活力狀態，可以提供研究者更有效的資訊去評估諸如候選藥物反應，作用途徑的活化/抑制因子，報導基因等。這裡使用Calcium AM染劑為例，它是一種活細胞用的螢光細胞染劑，有絕佳的細胞膜穿透力。染劑進入細胞後，會被酯酶水解為Calcein，發出強綠色螢光。Calcein AM的另一優勢是的細胞毒性極低，非常適合於長時間活細胞實驗。 應用上也會搭配Ethidium homodimer（如EthD-III）等同時檢測細胞死亡事件。EthD-III本身幾無螢光，也不能通透細胞膜，但一旦細胞膜完整性破壞，EthD-III就可滲入並和核酸相結合，發出明亮的紅色螢光。Calcein AM與EthD-III同時使用，可以更靈敏的反應細胞群體的活力狀態，不受起始細胞密度誤差的影響，適用于高通量藥物毒性和細胞增殖分析。 【範例】以SpectraMax® iD3檢測細胞活力狀態 以SpectraMax iD3進行觀測及記錄，並以SoftMax Pro內建的EarlyTox範本進行後續分析。 【實驗材料及方法】 這裡推薦採用Molecular Devices提供的免洗式EarlyTox系列試劑盒，包括 · EarlyTox Live Cell Assay kit (P/N R8342標準包或P/N R8343重量包) · EarlyTox Glutathione Assay Kit (P/N R8344標準包或P/N R8345重量包) · EarlyTox Caspase-3/7 R110 Assay Kit (P/

【摘要】 　　 細胞凋亡是一種發生在多細胞生物體內的 程式性細胞死亡過程(Program Cell Death) ，特微是細胞形態逐步變化並造成細胞死亡。 　　 形態變化包括形態變化包括 細胞收縮、核分裂、染色質凝縮、染色體斷裂及 mRNA 衰減 。細胞凋亡是一種高度調控的過程，通過內在途經對各種壓力源做出回應，包括饑餓、感染、缺氧和氧化應激反應等。 　　 粒線體損傷 在細胞凋亡的啟動過程中發揮重要的作用。在外部通路中，外部信號介導了細胞凋亡的產生，包括腫瘤壞死因子受體家族介導信號。在細胞凋亡的啟動過程中發揮重要的作用。在外部通路中，外部信號介導了細胞凋亡的產生，包括腫瘤壞死因子受體家族介導信號。細胞凋亡調控過程的破壞與包括癌症在內的許多疾病相關。本篇專輯將介紹一種利用 自動細胞成像 系統進行細胞凋亡檢測的方法。 自動化的優勢 採用簡單、免洗的均質化(homogenous)方法評估細胞凋亡狀態 系統快速獲取並分析圖像，並以規格化資料庫統一管理 採用自動分析模組取代人工，快速對待檢細胞進行量化分析，減少主觀偏差 【方法 】 　　 將人宮頸癌細胞系 HeLa，培養在 Greiner 公司黑邊底透的 96 孔多孔盤中，每孔 5,000 個細胞，37°C，5%CO2 條件下過夜培養。 第二天，分別用不同濃度的抗腫瘤化合物十字孢堿(Staurosporine)、絲裂黴素 C(Mitomycin C)和喜樹堿(Camptothecin)處理這些細胞誘導凋亡。化合物的最高濃度分別為：10μM 十字孢堿；200μM 絲裂黴素 C；100μM 喜樹堿。 加藥處理 18 小時後，使用試劑盒 EarlyTox™Caspase-3/7 NucView 488dye 和 Ethidium Homodimer III 染料以終濃度 5μM 和 3μM 分別對細胞染色 30 分鐘，之後用 Hoechst 33342 以終濃度 6μM 對細胞進行染色，同時將細胞放回 37°C，5%CO2 培養箱中靜置 15 分鐘。 【 EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 試劑盒 】 　　 Caspase-3、Caspase-7 是在細胞程式性死亡過程中被啟動的蛋白酶。EarlyTox 試劑盒中的 Caspase-3/7